Expérience
Expérience "Coloration de gram"
Pourquoi réaliser cette experience ?
Elle permet d'identifier les bactéries responsable d'un germe infectieux ou d'une contamination et de classer les bactéries en fonction de leur forme (cocci ou bacille) et de leur coloration (gram- ou gram+)
Ainsi elle permet de confirmer ou d'émettre un diagnostic sur une quelconque contamination et de mettre en place un traitement efficace contre la bactérie concernée: c'est à dire utiliser le bon antibiotique sur la bonne bactérie.
Au préalable,nous avons fait une demande de matériel au laboratoire comportant:
MATERIEL : PRODUITS :
-lames et lamelles -un pot de yaourt
-une anse de platine -une pissette d’eau distillée
-un bec bunsen -de l'alcool absolu(+90°)
-un microscope à immersion -un flacon de violet de gentiane
-un flacon de solution de lugol
-un flacon de fuschine
-papier absorbant
-huile(microscope à immersion )
Protocole
1.Anse de platine(ou autre) stérilisée par chauffage au rouge à la flamme du bec bunsen
2.Prélever une goutte de yaourt(ici un yaourt pour notre expérience) avec l’anse de platine refroidie. La déposer sur une lame. Restéréliser l'anse(ou autre)
3.Passer rapidement la face de la lame, frottis séché sur le dessus, en écrasant la flamme 3 fois
4.Recouvrir de violet de gentiane en versant le colorant en bout de lame et en le faisant glisser le long de la lame.
Laisser agir de 30 secondes à 1 minute.
Rincer à l'eau déminéralisée pour éliminer l’excédent de colorant
5.Pencher la lame et éliminer le violet de gentiane en faisant couler sur la lame la solution de lugol
Laisser agir 30 secondes
Rincer à l'eau déminéralisée pour éliminer l’excédent de lugol
6.Verser quelques gouttes d’alcool sur le frottis tenu verticalement jusqu’à ce que l’alcool s’écoule non teinté (environ 5 secondes)
Rincer avec un jet de pissette d’eau déminéralisée
Nettoyer le dessous de la lame à l’alcool puis à l’eau
7.Recolorer par de la fuschine en versant le colorant en bout de lame et en le faisant glisser le long de la lame.
Ne pas verser la fuschine sur le frottis pour éviter une coloration trop intense
Laisser agir de 10 secondes à 20 secondes.
Rincer avec un jet de pissette d’eau déminéralisée
Laisser sécher
Après avoir appliqué le protocole,il faut passer le(s) lame(s) au microscope par immersion *1000.
L'expérience est terminé! Il vous suffit de noter les observations et ainsi vous pouvez classer les bactéries.
Nos observations (expérience réalisé avec un yaourt): il y a des grappes de bacilles violettes et quelques coccies. Par conséquent les bactéries de yahourt sont de gram positive.
Cette expérience est utilisée pour classifier les bactéries en différentes familles en vue des différents traitements et types d'action (voir partie B.)
Nous vous invitions également à vous rendre sur ce site qui va vous permettre d'effectuer vous même une coloration de gram sur différentes souches de bactéries: https://infolabo.free.fr/animations/gram.html
De gauche à droite, Grégoire, Nicolas, Julien et Mario.
Merci à toute l'équipe du laboratoire pour nous avoir fourni matériels et locaux.
Après recherche on apprend que:
La paroi des bactéries à Gram positif est relativement imperméable à la plupart des
antibiotiques (voir schéma diaporama oral).
Tandis que la paroi des bactéries à Gram négatif est en règle générale
plus perméable à cause de l'absence de paroie (ou en quantité infime, voir diapo).
Les antibiotiques seront beaucoup plus efficace sur les bactéries à Gram négatif (en general).Mais cela depend également de la specificité de la bactérie (quelle soit gram - ou + ) c'est à dire plus ou moins resitante face aux antiobiotiques (partie C).